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在PCR反應(yīng)體系里,添加劑DMSO的功能是什么?

發(fā)布日期:2025-04-08 17:13:59   瀏覽量 :88
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DMSO主要用于高GC含量的模板擴(kuò)增,可能的機(jī)理是改善GC含量高的DNA的變形情況,降低其二級(jí)結(jié)構(gòu),使得聚合酶在二級(jí)結(jié)構(gòu)處延伸。

DMSO可以提高PCR的特異性,幫助擴(kuò)增一些難擴(kuò)的模板。

當(dāng)體系中加入DMSO時(shí),可適當(dāng)降低退火溫度。

在實(shí)踐中,聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)可能因各種原因而失敗,通常表現(xiàn)為兩個(gè)問題,一是目的模板的擴(kuò)增量太少,二是非目的基因擴(kuò)增太多。

這種情況研究人員通常會(huì)在反應(yīng)體系中加入合適的添加劑進(jìn)行解決。

通常添加劑的作用主要是降低基因的二級(jí)結(jié)構(gòu)或者降低非特異性的啟動(dòng)。


下面是幾種常用的添加劑以及它們的作用:

① 二甲基亞砜DMSO、非離子性洗滌劑、甜菜堿——可以降低DNA二級(jí)結(jié)構(gòu)

② 甲酰胺、四甲基氯化銨TMAC——降低非特異性啟動(dòng)

③ 鎂離子——聚合酶不可缺少的一個(gè)輔因子

④ 牛血清白蛋白——減少污染物


 


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