一、透析的原理
透析只需要使用專(zhuān)用的半透膜即可完成。通常是將半透膜制成袋狀,將生物大分子樣品溶液置入袋內(nèi),將此透析袋浸入水或緩沖液中,樣品溶液中大分子量的生物分子被截留在袋內(nèi),而鹽和小分子物質(zhì)不斷擴(kuò)散透析到袋外,直到袋內(nèi)外兩邊的濃度達(dá)到平衡為止。保留在透析袋內(nèi)未透析出的樣品溶液稱(chēng)為“保留液”,袋(膜)外的溶液稱(chēng)為“滲出液”或“透析液”。
透析的動(dòng)力是擴(kuò)散壓,擴(kuò)散壓是由橫跨膜兩邊的濃度梯度形成的。透析的速度反比于膜的厚度,正比于欲透析的小分子溶質(zhì)在膜內(nèi)外兩邊的濃度梯度,還正比于膜的面積和溫度,通常是4℃透析,升高溫度可加快透析速度。
二、透析袋使用前的處理
為防干裂,出廠(chǎng)前透析袋一般都經(jīng)10%的甘油處理,透析袋中含有微量的硫化物、重金屬和一些具有紫外吸收的雜質(zhì),它們對(duì)蛋白質(zhì)和其他生物活性物質(zhì)有害,用前必須除去。新購(gòu)進(jìn)的普通型透析袋必須經(jīng)過(guò)處理才能使用。處理方法如下。
1.把透析袋剪成適當(dāng)長(zhǎng)度(10-20cm)的小段。
2.在大體積(500ml)的2%(w/v)的碳酸氫鈉和1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中將透析袋煮沸10min。
3.用蒸餾水徹底清洗透析袋。
4.放在500ml的1mmol/L EDTA2Na(pH=8.0)中將之煮沸10min。
5.冷卻后,置于30%或者50%的酒精中,放于4℃冰箱,必須確保透析袋始終浸沒(méi)在溶液內(nèi),從此時(shí)其取用透析袋必須戴手套。
6.在使用前要用蒸餾水將透析袋里外加以清洗干凈。
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