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核酸凝膠染料的使用方法

發(fā)布日期:2025-01-14 17:11:02   瀏覽量 :332
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A. 預(yù)制凝膠法

1. 將GelRed(10,000X)原液以1:10,000比例加入到熔化的凝膠中,混合均勻。(GelRed可在加熱后的凝膠冷卻至45℃左右時添加。)

2. 倒膠,室溫放置等待凝固。

3. 按常規(guī)方法上樣電泳。

4. 觀察染色凝膠使用標(biāo)準(zhǔn)的透照儀(302或312 nm),成像使用溴化乙錠濾光器,SYBR或GelStar濾光器凝膠成像也可以得到很好的結(jié)果。

5. 未使用的含有GelRed的預(yù)制凝膠可以重新熔化做膠,為保證最佳熒光信號,酌情添加適量染料。不建議長期儲存含有GelRed熔化形式的瓊脂糖。含有GelRed的預(yù)制膠可以保存在4℃供下次使用。


B. 泡染法

1. 按照常規(guī)方法進(jìn)行凝膠電泳。

2. 稀釋 GelRed :用水將10,000X儲備液稀釋3300倍制成3X染色液。通常情況下50mL染色液足夠染一小塊凝膠。(注:染色液中含有0.1 M NaCl能增強(qiáng)靈敏度,但可能會促使凝膠染色出現(xiàn)沉淀。)

3. 把凝膠放于合適的容器,如聚丙烯染色托盤中。添加足量的3X染色液至浸沒凝膠。

4. 室溫緩慢振蕩染色30min。注:最佳染色時間根據(jù)凝膠厚度以及瓊脂糖濃度不同略有不同。對于含3.5-10%丙烯酰胺的凝膠,染色時間通常介于30min至1h,并隨丙烯酰胺含量增加而延長。

5. 不必脫色,必要的話可以水洗以降低背景值。

6. 使用標(biāo)準(zhǔn)的透照儀(302或312 nm)觀察染色凝膠,成像使用溴化乙錠濾光器,SYBR 或 GelStar濾光器凝膠成像也可以得到很好的結(jié)果。

7. 染色液可重復(fù)使用2-3次,室溫下避光保存。


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