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小白養(yǎng)細胞快速上手指南

發(fā)布日期:2025-01-02 17:30:51   瀏覽量 :172
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剛接觸細胞培養(yǎng)的小白,生物實驗技術理論知識一堆,但真正到操作環(huán)節(jié)手忙腳亂,一堆“黑話”一頭霧水,常常不知從哪里下手。
耐思將系統(tǒng)介紹細胞培養(yǎng)知識,帶領細胞小白從0到1,成為大神!
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01 為什么要進行細胞體外培養(yǎng)

社會上習慣于把科學和技術連在一起,統(tǒng)稱為科學技術,簡稱科技??茖W解決理論問題,技術解決實際問題??萍家I我們走向更好的生活
現(xiàn)代生物技術一般認為包括基因工程技術、細胞工程技術、酶工程技術和發(fā)酵工程技術,而這些技術的發(fā)展幾乎都與細胞培養(yǎng)有密切關系。
醫(yī)藥領域(基因工程藥物或疫苗在研究生產(chǎn)過程中很多是通過細胞培養(yǎng)來實現(xiàn))、基因工程(乙肝疫苗很多是以 CHO 細胞作為載體)、細胞工程(雜交瘤單克隆抗體,完全是通過細胞培養(yǎng)來實現(xiàn)),既使是現(xiàn)在飛速發(fā)展的基因工程抗體也離不開細胞培養(yǎng);正在倍受重視的基因治療、體細胞治療也要經(jīng)過細胞培養(yǎng)過程才能實現(xiàn),發(fā)酵工程和酶工程有的也與細胞培養(yǎng)密切相關。
總之,細胞培養(yǎng)在整個生物技術產(chǎn)業(yè)的發(fā)展中起到了很關鍵的核心作用。

02 細胞培養(yǎng)基本概念

細胞培養(yǎng)
將活細胞(尤其是分散的細胞)在體外進行培養(yǎng)的方法稱為細胞體外培養(yǎng)。狹義的主要是指分離(散)細胞培養(yǎng),廣義的還包括單(個)細胞培養(yǎng)又稱克隆,是指單個細胞通過有絲分裂形成的細胞群體。

原代細胞
初次培養(yǎng)。即培養(yǎng)物一經(jīng)接種到培養(yǎng)皿中就不再分割,任其生長繁殖而不更換生長器皿。

傳代培養(yǎng)
隨著培養(yǎng)時間的延長、細胞不斷分裂繁殖,細胞之間相互接觸會發(fā)生接觸性抑制,生長速度逐漸減慢甚至停止。培養(yǎng)皿中營養(yǎng)物逐漸不足,代謝產(chǎn)物不斷累積,不利于細胞繼續(xù)生長。在這種情況下,需要將培養(yǎng)物分割成小的部分,重新接到培養(yǎng)器皿中進行再培養(yǎng)。

細胞系
原代細胞培養(yǎng)物經(jīng)首次傳代培養(yǎng)后所繁殖的細胞群體。狹義的是指可連續(xù)傳代的細胞,廣義的是指可傳代的細胞。正常細胞通常只能分裂有限的次數(shù),隨后就會喪失增殖的能力,這是一個由遺傳決定的事件,被稱為衰老。這種細胞系被稱為有限細胞系;一些細胞系會通過轉(zhuǎn)化的過程變?yōu)橛郎约毎担@一過程可自然發(fā)生,也可經(jīng)化學或病毒誘導發(fā)生。有限細胞系發(fā)生轉(zhuǎn)化獲得無限分裂能力后就成為連續(xù)細胞系。

 
03 細胞培養(yǎng)的環(huán)境

細胞培養(yǎng)實驗室的主要要求是時時維持細胞培養(yǎng)工作區(qū)域處于無菌狀態(tài),獲得無菌條件最簡單、經(jīng)濟的方式就是使用細胞培養(yǎng)超凈臺。
細胞培養(yǎng)超凈臺應足夠一人使用,內(nèi)外部均采用易清潔設計,具有充足的照明,使用舒適。
使用過程中需保持細胞培養(yǎng)超凈臺內(nèi)工作空間整潔有序,將所有物品放在直視范圍內(nèi),便于取用。使用前向放入細胞培養(yǎng)超凈臺內(nèi)的物品噴灑70%的乙醇,擦拭清潔,進行消毒。
細胞培養(yǎng)通超凈臺的物品擺放一般遵循以下右手使用習慣,可根據(jù)特殊實驗中增加的物品進行相應的適當改動。


超凈臺中部
擺放細胞培養(yǎng)類耗材。耐思細胞培養(yǎng)類耗材除了板、瓶、皿等常規(guī)耗材,更具備高品質(zhì)大規(guī)模生物工藝器皿,規(guī)格全面,型號豐富。


超凈臺右前方
擺放移液耗材及器械,便于取用。耐思液體轉(zhuǎn)移類耗材多樣,移液吸頭、離心管、真空過濾器、血清移液管等應有盡有。


超凈臺右后方
擺放生物試劑和培養(yǎng)基,便于吸取。耐思生物試劑類產(chǎn)品包含核酸提取與純化試劑、PCR/RT-PCR相關試劑、實驗室常規(guī)試劑、基因敲除試劑等。


超凈臺中后部
擺放試管架等,用于固定其他試劑。


超凈臺左后方
擺放小型容器,用于盛放廢液。

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