1、材料
合適的Marker(分子量標準);DNA 樣品
2、試劑
加樣緩沖液(6x或10x);瓊脂糖;溴化乙錠(EB)。
3、器具
(1)電泳系統(tǒng):電泳儀、水平電泳槽、制膠板等。
(2)凝膠成像系統(tǒng)或紫外透射儀。
1、按所分離的 DNA 分子的大小范圍,選擇合適的比例的凝膠,稱取適量的瓊脂粉,放到一錐形瓶中,加入適量的 TBE電泳緩沖液。然后置微波爐加熱至瓊脂粉完全溶化,溶液透明。稍搖勻,得膠液。待膠液卻至 60℃左右,在膠液內(nèi)加入適量的比例的溴化乙錠液。
2、水平放置膠槽,在一端插好梳子,在槽內(nèi)緩慢倒入已況至 60℃左右的膠液,使之形成均勻水平的膠面。
3、待膠凝固后,小心拔起梳子,使加樣孔端置陰極段放進電泳槽內(nèi)。
4、在槽內(nèi)加入TBE電泳緩沖液,至液面覆蓋過膠面。
5、把待檢樣品,按合適比例與加樣緩沖液混勻,用移液槍加至凝膠的加樣孔中。
6、接通電泳儀和電泳槽,并接通電源,調(diào)節(jié)合適電壓,穩(wěn)壓輸出,開始電泳。
7、觀察溴酚蘭的帶(藍色)的位置。當其移動至約凝膠長2/3處時,可停止電泳。
8、在紫外透視儀的樣品臺上重新鋪上一張保鮮膜,趕去氣泡平鋪,然后把凝膠放在上面。關上樣品室外門,打開紫外燈(360nm 或 254nm),通過觀察孔進行觀察。
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