(1) 計算每次注射所需抗原的量和體積。皮下注射或肌肉注射時，每只小鼠每次 5-I00ug 抗原 ，注射體積小于 20uL; 

腹腔內(nèi)注射時，每只小鼠每次注射體積為 200?500ul。

強洗滌劑會減弱乳化效應, 需避免。

準備大約比最終所需量多50%的疫苗 。

(2) 根據(jù)所加材料的總體積選擇針筒。佐劑和抗原的總體積應大約為針筒體積的一半 。

例如 ，準備 2.5ml 的疫苗時，用 5ml 的針筒進行乳化。

(3) 使用前 37℃預熱弗氏完全佐劑（或弗氏不完全佐劑），振蕩1-2 min或用手倒轉瓶子數(shù)次，將結核分枝桿菌均勻重懸。

吸取所需體積的弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑到針筒內(nèi)，連接針筒到雙孔接頭，排出空氣 (過量空氣將妨礙穩(wěn)定的乳化劑的形成）。

(4) 吸取水溶性抗原到另一針筒，排出空氣（過量空氣可妨礙穩(wěn)定的乳化劑的形成）。

(5) 將有抗原的針筒連在雙孔接頭的一端。

確定兩個針筒均經(jīng) Luer-lock 安全地固定在雙孔乳化接頭上。

(6) 平穩(wěn)地推動活塞，使所有的抗原溶液穿過雙孔接頭與弗氏完全佐劑或弗氏不完全佐劑混合。

相互交替，持續(xù)使混合物從一個針筒轉到另一個 。

(7) 按上述步驟繼續(xù)乳化，直到穩(wěn)定的乳化劑形成。

這將需要數(shù)分鐘。推出一小滴乳化劑到盛有水的燒杯內(nèi)，小乳滴應該在水面形成穩(wěn)定的油珠。

如果乳劑滴人水面分散，重新組裝針筒，繼續(xù)乳化。

(8) 將所有乳化劑推人一個針筒。拔去雙孔接頭，加上注射針頭。

另外可選擇將空針筒拔去，換上1ml 無菌針筒。

此時，乳化劑可轉入1ml 針筒以備注射。

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