1、速凍是冰凍切片的關(guān)鍵,因?yàn)橹挥兴賰霾拍軠p少組織內(nèi)的冰晶,最好的辦法就是將速凍頭迅速壓在組織上,切好后就可以凍片,特別適用于較脆的組織。
2、固定切片后應(yīng)立即放入甲醇冰醋酸中固定,不能等切片干后再固定,后者容易造成細(xì)胞退變。固定液有很多種,甲醇作用快、收縮小、染色較清晰,是冰凍切片最理想的固定液,而每97ml加入冰酸醋3ml,會(huì)減少某些膠質(zhì)、鈣質(zhì)較多的組織不容易掉片。
3、包埋劑可用普通膠水代替,但要加入適量的水(膠水與水的比例大約在2:1)。
太稀了容易損傷切片刀,太稠了黏在刀上不容易洗掉,影響切片的質(zhì)量。
4、冰凍用切片刀不僅要磨得快,而且要磨得直,否則切出來(lái)的片子就會(huì)不平整,不能進(jìn)入抗卷板(最好使用一次性刀片)。
5、如組織發(fā)脆,可以等幾分鐘后再切,也可用手在組織上稍微加溫;如果用手去摸組織塊,最好戴手套,或用玻片間的紙夾在手與組織之間,以防感染。
6、冷凍室的室溫冬天一般設(shè)置在-19℃左右,夏天設(shè)置在-22℃左右。
不同的組織有不同的溫度要求,如肝臟、甲狀腺組織溫度應(yīng)設(shè)置在-15℃左右,脂肪組織一般設(shè)置在-35℃以下。
7、冷凍切片機(jī)應(yīng)長(zhǎng)期處于恒溫冷凍狀態(tài),經(jīng)常的開(kāi)關(guān)電源容易造成設(shè)備損壞。
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