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脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染的操作步驟

發(fā)布日期:2023-12-22 17:27:56   瀏覽量 :772
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操作步驟:
(1) 細(xì)胞培養(yǎng):取 6 孔培養(yǎng)板 (或用 35 mm 培養(yǎng)皿),向每孔中加入 2 mL 含 1~2×105 個(gè)細(xì)胞培養(yǎng)液,37℃ CO2 培養(yǎng)至 40%~60% 匯合時(shí) (匯合過分,轉(zhuǎn)染后不利篩選細(xì)胞)。
(2) 轉(zhuǎn)染液制備:在聚苯乙稀管中制備以下兩液 (為轉(zhuǎn)染每一個(gè)孔細(xì)胞所用的量)A 液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋 1-10 μg DNA,終量 100μL,B 液:用不含血清培養(yǎng)基稀釋 2-50 μgLR,終量 100μL,輕輕混合 A、B 液,室溫中置 10-15 分鐘,稍后會(huì)出現(xiàn)微濁現(xiàn)象,但并不妨礙轉(zhuǎn)染 (如出現(xiàn)沉淀可能因 LR 或 DNA 濃度過高所致,應(yīng)酌情減量)。
(3) 轉(zhuǎn)染準(zhǔn)備:用 2 mL 不含血清培養(yǎng)液漂洗兩次,再加入 1 mL 不含血清培養(yǎng)液。
(4) 轉(zhuǎn)染:把 A/B 復(fù)合物緩緩加入培養(yǎng)液中,搖勻,37℃ 溫箱置 6~24 小時(shí),吸除無血清轉(zhuǎn)染液,換入正常培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)。
(5) 其余處理如觀察、篩選、檢測等與其它轉(zhuǎn)染法相同。
注意:轉(zhuǎn)染時(shí)切勿加血清,血清對(duì)轉(zhuǎn)染效率有很大影響。

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