ELISA基于特異性抗原抗體反應，通常用到的是固相酶聯(lián)免疫吸附方法，這里以最常使用的夾心法為例，其基本步驟為：

• 將包被抗體固定在微孔板表面
• 從板上洗去未被結合抗體
• 加入質控抗原或含有目標物的樣本
• 洗去其他雜蛋白，加入標記的檢抗
• 添加酶特異性底物，產生有色產物，使用酶標儀進行比色測定即可

辣根過氧化物酶(HRP)或堿性磷酸酶是ELISA中常用的酶，而底物包括四甲基聯(lián)苯胺(TMB)或2, 2'-疊氮基-雙-3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸(ABTS)。通常選擇重復或三次采樣，并且使用不同濃度的樣品以確保生物學上可接受的檢測范圍。