1. 抗原選擇:
在實(shí)驗(yàn)中,可以使用蛋白質(zhì)、多肽、細(xì)胞器、細(xì)胞和組織等作為抗原。根據(jù)不同的實(shí)驗(yàn)需要,選擇合適的抗原進(jìn)行免疫。
2. 免疫方式:
根據(jù)實(shí)驗(yàn)要求,可以采用皮下注射、腹腔注射、靜脈注射、肌肉注射等方式進(jìn)行免疫。根據(jù)動(dòng)物的種類以及免疫物質(zhì)的大小,選擇適合的注射方式。
3. 注射劑量:
根據(jù)免疫物質(zhì)的大小和動(dòng)物的種類,注射的劑量有所不同。下面是一個(gè)典型的注射劑量表,單位為微克(μg)。
>18-20kDa <18-20kDa
動(dòng)物 抗原量 最佳抗原量 抗原量 最佳抗原量
兔子 20-200 100 50-400 200
小鼠 2-40 15 4-60 40
大鼠 10-50 30 20-150 50
綿羊 100-1000 200 200-1000 400
母雞 20-200 100 50-400 200
4. 注意事項(xiàng):
- 初次免疫時(shí),使用完全佐劑與免疫原混合;加強(qiáng)免疫時(shí)使用不完全佐劑與免疫原混合。
- 采用多點(diǎn)、時(shí)間間隔式免疫法,確保免疫效果的穩(wěn)定性和持久性。
- 如果使用細(xì)胞進(jìn)行免疫,兔子每次免疫所需細(xì)胞量為2-3 x 107 cells。
- 在連續(xù)免疫完三次后,應(yīng)進(jìn)行ELISA檢測(cè)動(dòng)物的抗體滴度。一般滴度能達(dá)到1:10,000-50,000。在處死動(dòng)物前一周,應(yīng)加強(qiáng)一次免疫。
- 如果使用小鼠免疫,可以在尾靜脈采集小量血液(約50µl),最后在取眼球時(shí)采集大量血液(約500-1000µl)。如果使用兔子進(jìn)行免疫,可以在耳緣靜脈采集小量血液(約2mL),最后在心臟處采集大量血液(50-100mL)。
- 采集血液后,按血清制備的標(biāo)準(zhǔn)方法使用離心機(jī)將血清離心分離,并分裝成小份,儲(chǔ)存在-80°C的實(shí)驗(yàn)室冰箱中。
在實(shí)驗(yàn)過程中,高速離心機(jī)和離心管是必備設(shè)備,用于血清制備和離心過程。這些設(shè)備的正確使用是保證實(shí)驗(yàn)質(zhì)量的重要環(huán)節(jié)。
總之,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物免疫方案需要根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)動(dòng)物種類進(jìn)行調(diào)整和優(yōu)化。在實(shí)驗(yàn)過程中,嚴(yán)格遵守操作規(guī)范,并根據(jù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行進(jìn)一步分析和研究,以獲得準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。
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